Procuramiento, aislamiento y expansión de células madre mesenquimales derivadas de cordón umbilical:

¿Qué son las células madre mesenquimales?
Las Células Madre Mesenquimales derivadas de cordón umbilical (CMM-CU), son células que tienen la habilidad de formar y reparar los diferentes tejidos encontrados en el cuerpo. El efecto reparador es causado por las moléculas altamente especializadas como los factores de crecimiento, que son señales para la regeneración y reparación. Las CMM son invisibles al sistema inmune (debido a la nula o baja expresión de MHC clase 2) lo que las hace capaces de hacer su efecto sin generar rechazo.

La recolección de tejido de cordón se realiza con un “consentimiento informado de donación de tejido”, en donde la madre donante consiente su intención de donar el tejido. Luego nuestra matrona obtiene los análisis serológicos (VIH, Hepatitis, Sífilis y Gonorrea) de entrada y salida del embarazo, que nos permite dar seguridad a nuestros pacientes (Parámetros alterados, nos hacen descartar el tejido).

El aislamiento se realiza de acuerdo a un protocolo operativo estándar, que en resumen; se realiza un proceso de desinfección del tejido y luego se procede a eliminar tejido vascular del cordón, todo de manera aséptica. Finalmente el tejido se corta en trozos de 1-2 milímetros, se deposita en botellas de cultivo celular y se agrega medio de cultivo en un volumen mínimo para estimular la adhesión, el medio de cultivo se cambia cada 2-3 días, entre los 11-21 dias tenemos la migración de las células madre desde los explantes de cordón hacia la base la botella de cultivo. Cuando se observa por microscopía qie la botella presenta varios “parches celulares”, se realiza un subcultivo.

La expansión y/o proliferación de las células, se realiza también de acuerdo a un protocolo operativo estándar, el que consiste principalmente en el monitoreo, cambio de medio, cosecha, conteo, resiembra en subcultivo siguiente y criopreservación. En resumen: se cambia el medio de cultivo dos veces a la semana, cuando el cultivo llega a confluencia (momento que que la proliferación celular llega al 70-90% del área de cultivo) generalmente en 1 semana, momento en el cual debe realizarse la cosecha celular. El subcultivo primero comienza con la cosecha de la botella, primero se lava del medio de cultivo, con solución buffer fosfato dulbecco (DPBS), se agrega luego tripsina-EDTA, durante 5 minutos, que permite que se despeguen las células del fondo de la botella, se aplican un par de golpecitos a las botellas y se recupera el concentrado en un tubo esteril, luego se lavan las botellas con DPBS y se colectan en tubo esteril. Todos los tubos se centrifugan y luego se suspende el precipitado celular en DPBS. Pudiendo subcultivar las células varias veces. El conteo, se realiza en una “cámara de neubauer” (cámara de recuento celular), en donde en otro tubo esteril se aplica 10uL de “azul tripan” y 10uL de una alícuota del concentrado celular resuspendido. Luego se calcula y queda el resultado en células en un mililitro. La resiembra permite seguir expandiendo el cultivo en el tiempo, se siembran 10.000 células/ cm2. En el subcultivo número 1 u 2, parte de las células son criopreservadas, para poder hacerlo se resuspenden en suero fetal bovino (FBS) y se agrega DMSO (dimetil sulfóxido) en una proporción 9:1 que permite y protege a la célula de los cristales en la criopreservación. Luego son homogeneizadas y puestas en criotubos rotulados y mantenidas a -80° celsius hasta por 4-6 meses.

Todo se realiza de acuerdo a las Buenas Prácticas de Manufactura, asegurando la calidad del producto.

Criterio de Calidad: las CMM-CU tienen el privilegio que son jóvenes, por esto mismo pueden subcultivar (cosecha y resiembra) varias veces, ( entre 8-12 subcultivos), desde los pasajes 7-en adelante pueden sufrir senescencia (avejentamiento) que las hace perder su eficacia. Nuestro criterio de calidad es subcultivar las células solo hasta el pasaje 6. que nos permite brindar el máximo potencial de regeneración a nuestros pacientes.